编号：YYHY00494
篇名： 多壁碳纳米管对人胸膜间皮细胞microRNAs表达的影响
作者： 尹先宏 ;鞠莉 ;武为 ;肖芸 ;应士波 ;张敏 ;楼建林 ;贾振宇 ;夏海玲 ;朱丽瑾 ;张幸
关键词：多壁碳纳米管 胸膜 微rRNA 间皮瘤
机构：浙江省医学科学院职业病防治研究所,杭州310013
摘要： 目的探讨多壁碳纳米管（multi—walled carbon nanotubes，MWCNT）对人胸膜间皮细胞MeT-5A的细胞毒性及对细胞microRNAs（miRNAs）表达的影响。方法用乳酸脱氢酶活力检测法（LDH）检测不同浓度MWCNT染毒24h和同一浓度不同染毒时间细胞相对LDH活力改变；从课题组前期microRNA芯片结果中筛选间皮瘤细胞中差异表达miRNAs，并用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT—qPCR）验证有显著改变的5个miRNAs的表达改变；MeT-5A细胞用10μg／cm。的MWCNT处理0、8、24、48、72h后，用RT—qPCR方法检测上述5个有明显改变的miRNAs的表达水平；用Targetscan和miRanda两种在线软件对差异表达miRNAs进行靶基因预测，最后用David6．7对靶基因进行基因本体论（GO）分析和全基因组及代谢途径数据库（KEGG）通路分析。实验数据录入SPSS17．0软件，使用单因素方差分析（one—wayANOVA）和Dunnett—T检验进行统计分析。结果MWCNT染毒MeT-5A24h后，与对照组比较，染毒剂量大于等于20μg／cm。时，细胞存活率降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；利用高通量方法从肿瘤细胞系中筛选获得5个差异表达的miRNAs：hsa—miR-155表达上调，hsa．miR．30d-5p，hsa—miR-34c-5p，hsa-miR-28-5p和hsa—miR-324—5p的表达下调；用RT—qPCR方法进一步验证，两者结果一致。10μg／cm。MWCNT染毒不同时间后，5个miRNAs表达改变与芯片结果一致。我们对这些差异表达miRNAs进行靶基因预测和通路分析，发现AKAP13，CCND3，Twist，E—Cadherin等是其潜在的功能靶点，主要参与肿瘤坏死因子p信号通路，肿瘤信号通路，小细胞肺癌等信号通路。结论MWCNT可对MeT-5A造成细胞毒性作用，染毒可引起MeT-5A细胞miRNAs差异表达，差异表达的miRNAs可能参与肿瘤相关的信号通路。